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关于生物技术综合实验报告(通用10篇)
在我们平凡的日常里,报告与我们的生活紧密相连,报告包含标题、正文、结尾等。相信许多人会觉得报告很难写吧,下面是小编整理的关于生物技术综合实验报告,希望能够帮助到大家。
生物技术综合实验报告 1
研究背景
谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 保护细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 可以调控GSH的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫过程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。
实验一 甘薯叶片RNA提取
一、实验目的
1.了解真核生物RNA提取的原理;
2.掌握Trizol提取的方法和步骤。
二、实验原理
Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂,在匀浆和裂解过程中,能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。TRIzol的'主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。0.1%的8-羟基喹啉可以抑制RNase,与氯仿联合使用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失,导致细胞结构降解,核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后,RNA处于水相中,将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方法得到的总 RNA中蛋白质和DNA污染很少。
三、实验材料
1.材料
甘薯(Ipomoea batatas Lam)叶片,品种为徐薯18
2.试剂
① 无RNA酶灭菌水:加入0.01%的DEPC,处理过夜后高压灭菌;
② Trizol试剂;
③ 氯仿;
④ 异丙醇、75%乙醇;
⑤ TBE缓冲液;
⑥ 上样缓冲液(6×)
3.仪器
高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、1.5mL塑料离心管、枪头和EP管架
四、实验方法
1.将叶片取出放入研钵中,加入适量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂,室温放置5 min,使样品充分裂解;
2.每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿,用手剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相;
3.4℃ 12,000 rpm 离心15 min,吸取上层水相转移到新管中;在上清中加入等体积冰冷的异丙醇,室温放置15 min;
4.4℃ 12,000 rpm 离心10 min,弃上清,RNA沉淀于管底;
5.RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇(用RNase-free水配制),温和震荡离心管,悬浮沉淀; 4℃ 8,000 rpm离心2 min,弃上清;
6.室温放置10 min晾干沉淀;
7.沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O,轻弹管壁,以充分溶解RNA,-70℃保存;
8.用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测,用EB染色并照相。
五、实验结果
1.RNA提取结果
依照Trizol 试剂盒方法,提出的RNA较少,此部分未以图或数据显示。
2.RNA后电泳结果
其中9a为本组实验结果。由图可知RNA条带非常模糊,拖尾现象严重,几乎无法分清具体条带,亮度较大。点样孔附近的红色部分为杂质,在提取过程中并未很好除去。
RNA提取跑胶结果。其中1泳道为样品Marker,9a泳道为本小组RNA样品。与标准对照可见条带模糊,拖尾现象严重。
六、分析与讨论
1.RNA的提取
产量并不多,可能是因裂解样品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。在实验过程中,由于对操作时间的掌握不熟练、操作技巧不完善,留上清与弃上清时令RNA损失了部分,使最终RNA产量不理想。
2.RNA电泳结果
有EB存在时,电泳后28S rRNA和18S rRNA在紫外灯下应看得很清楚,另出现条由tRNA,5.8S rRNA和5S rRNA组成的较模糊、迁移较快的带。如果RNA没有降解,则28S rRNA的亮度应为18S rRNA的2倍,且这两条带都无弥散现象发生。由图1.9a可知,RNA拖尾现象严重,说明RNA已大部分被降解;此外点样孔附近出现红色部分杂质,分析可能有并未除尽的蛋白质,同样影响RNA电泳结果。
在进行实验时,本小组成员未严格戴上口罩并勤换手套,这可能使外源RNAase进入样品,导致其降解严重。另外,提取出RNA后本小组未立即将样品放入-70℃保存,也为导致结果不理想的重要原因之一。在最初用氯仿萃取分层的过程中,由于水相吸取过多,掺杂入部分蛋白质杂质而未于后续纯化步骤除尽,RNA条带拖尾严重可能还受该蛋白质影响。
七、总结:
本次试验RNA提取非常失败,从跑胶结果可见其降解严重。虽然大实验无法避免试剂交叉污染的可能性,且电泳用胶的质量也会影响实验结果,但从图1.2a,3a,2b等条带较为清晰的小组实验结果可知,琼脂糖凝胶质量以及试剂对结果干扰不大。那么本小组成员在提取过程中的操作一定出现了很大失误。首先口罩、手套应该严格按规定佩戴,提取过程对移液枪等仪器使用需谨慎仔细,尽量避免混入杂质。其次为排除部分杂质影响可对RNA样品用紫外线分光光度计测定吸光值检验,将有助于结果分析。最后,细节决定成败,我们应汲取教训避免接下来的实验出现类似问题。
实验二 第1链cDNA的合成和模板的验证
一、实验目的
1.掌握第1链cDNA的合成方法和步骤
二、实验原理
真核生物基因多为断裂基因,编码区不连续,需经转录后加工才能成为成熟mRNA。以真核成熟mRNA为模板合成cDNA,进而获得有连续氨基酸编码的DNA序列,无需转录后加工,即可在原核细胞中表达。
真核生物的mRNA都有PolyA尾巴。引物:Oligo dT(12-18个T)。莫洛尼
氏鼠白血病毒逆转录酶(M-MLV )以单链RNA为模板,在引物的引发下合成与模板互补的DNA链(cDNA)。
mRNA 反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR,RT-PCR比Northern杂交更灵敏,对RNA的质量要求较低,操作简便,它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。
三、实验材料
1.材料
徐薯18叶片RNA样品
2.试剂
① dNTP mixture(10 mM each);
② Oligo (dT) Primer (10 μM);
③ Total RNA;
④ RNase free ddH2O;
⑤ M-MLV 反转录酶;
⑥ 5×First-strand Buffer;
⑦ 0.1 M DTT;
⑧ Ribonuclease Inhibitor (40 U/μL)
3.仪器
10μL 和100μL 的移液枪、0.5mL的EP管、PCR仪等
四、实验方法
1.在RNase free Microtube 管中配制下列混合液:
dNTP mixture(10 mM each)1 μL
*Oligo (dT) Primer (10 μM) 4 μL
Total RNA2 μL
生物技术综合实验报告 2
(第一部分)
实验一 工作液的配制、培养基配制、器皿洗涤及灭菌
一、实验目的
掌握各种工作液配制方法;了解植物培养基的构成及配制方法;掌握高温高压灭菌的方法。
二、原理
培养基是植物组织培养的基本条件,同时也是关键因素。
湿热条件(121℃的蒸汽,10分钟)能够有效地杀灭附着在玻璃器皿、器具以及溶液和培养基中的微生物达到灭菌的目的。
三、器具和试剂
灭菌锅,天平,电炉,微波炉,三角瓶,封口膜,移液管,移液器,量筒,烧杯,pH试纸,培养皿,滤纸,Parafilm封口膜。
琼脂,MS培养基大量元素,无菌水,葡萄糖,2, 4-D,IBA,KT (激动素),1M NaOH及HCl,卡那霉素,头孢霉素,乙酰丁香酮 。
四、 实验内容
PH调节剂的配制、培养基母液的配制、培养基的配制、各种相关物品的准备
(一)培养基的配制步骤
1、取个干净烧杯,加入1/3-2/3左右的蒸馏水,用移液管取所需的母液加入烧杯。
2、称取定量的蔗糖加入烧杯中并不断搅拌,直到完全溶解,定容。
3、用NaOH或者 稀HCL调剂酸碱值。
4、称取定量琼脂糖加入烧杯中,加热煮沸搅拌,待琼脂完全溶解,分装。
5、高压灭菌(121℃,15min-20min)。
6、冷却,取出,备用。
(二)棉花无菌苗培养基的制备
1、取25 ml MS大量元素母液,称取葡萄糖15g、于1升的烧杯中,定容后调pH值为6.0,加入7.5g/l 琼脂煮沸。
2、然后将其分装到100毫升的三角瓶中,每瓶40毫升。
3、用封口膜封口后在灭菌锅中灭菌15分钟。
4、灭菌后臵于水平的工作台上冷却即可。
要求:配制 1L
(三)拟南芥无菌苗培养基的制备
1、拟南芥无菌苗培养基:1/2 MS大量元素+蔗糖10g/L,PH值6.0;加入7.5g琼脂高温高压灭菌。
2、0.1%琼脂糖:0.1g琼脂糖/100ml 蒸馏水;无菌苗培养基和0.1%琼脂糖均121°高压灭菌15分钟。
3、另准备20套9cm培养皿,灭菌。
要求:配制0.5L,装1瓶灭菌,灭菌后培养基倒皿。
五、注意事项
1、为了尽量减少人为的误差,必须严格按实验步骤进行操作,严格按照要求的量来配制工作液、母液及培养基。
2、应当把培养基中的.各种成分都写在纸上,加进去一个以后即划掉一个。
3、所有装着培养基的试管、玻璃罐、玻璃瓶和培养皿等都应当清楚地做上标记。
4、每小组的操作的具体事项请参照黑板上贴的任务分组。
5、爱护实验仪器及耗材,小心使用玻璃器皿,合理灭菌,因为灭菌耗时较长。
实验二 无菌苗的制备
一、原理
化学灭菌:0.1%升汞(Hgcl2)溶液浸泡10分钟可以对棉花种子等外植体进行灭菌,84消毒液(2%的次氯酸钠)浸泡3分钟可以对拟南芥等小种子外植体进行消毒。 物理消毒:紫外灯消毒、酒精灯火焰或高温烧灼5min左右可有效杀死镊子、剪刀等不锈钢操作器具的菌类达到消毒的目的。
二、实验材料、器具和试剂
棉花品种YZ1;拟南芥col-0野生型 灭菌锅,天平,电炉,三角瓶,封口膜,镊子,酒精灯,剪刀,移液管,超净工作台。
0.1%升汞溶液,84消毒液,75%酒精
三、实验内容
(一)拟南芥无菌苗培养基倒皿
1.取上次灭菌好的拟南芥培养基(500ml装),稍微拧松瓶盖,微波炉煮沸,边煮边摇动,至全部融化。
2.将上次灭菌好的9cm培养皿分开放臵超净工作台(超净工作台需先打开)上。
3.将融化好的培养基分装于培养皿中(500ml/18-20皿),将皿至于超净台上吹干.。
(二)共培养培养基的配制
成分数量 成分 数量
MS大量元素 (20倍) 50 ml 2,4-D (0.1mg/ ml)1 ml
NH4NO3 (20倍) 50 ml 甘氨酸(1000倍)1 ml
微量元素 (100倍)10 ml KT(0.1mg/ml)1 ml
铁盐 (100倍) 10 ml 葡萄糖 30g/L
微生素(1000倍) 1 mlPH值5.85-5.90 肌醇 (100倍) 1 ml
依次加入上述物质,调PH值5.85-5.90,然后分装至2个500ml蓝盖瓶,每瓶加入4g琼脂,灭菌,灭菌后倒皿。
(三)选择培养基的配制
共培养培养基 +卡那霉素50mg/L + 头孢霉素400 mg/L
灭菌后,待培养基凉至60度左右加入,混匀,倒皿。
(四)棉花无菌苗的制备
1、将棉籽用手术剪刀去壳(每人3颗,饱满无病虫害种子)。
2、用0.1%的升汞灭菌13分钟。
3、无菌水冲洗三遍,接种于无菌苗培养基中。
4、28℃条件下暗培养7天 (304培养箱)。
(五)拟南芥无菌苗的制备
大量法灭菌:将拟南芥种子放入1.5ml离心管中,加入84消毒液:无菌水=1:1的混合液1ml,上下摇晃灭菌2min,弃消毒液;加入1ml 75%的酒精混匀1min,然后无菌水清洗4次;加入0.1%琼脂糖溶液悬浮种子,用移液枪涂布于拟南芥无菌苗培养基,
吹干,封口。弱光培养两天至种子萌发,转至光照培养室培养两周(304培养箱)。
五、注意事项
所有操作(除数种子)均在超净工作台上进行。
六、实验结果
一周后观察无菌苗的生长状况
1、六瓶接种的棉花无菌苗中有一瓶被轻度污染,其余五瓶生长状况良好。
2、拟南芥的无菌苗因涂布不均匀长势一般,幼苗较其他小组要弱小,叶片颜色较深。
实验三 愈伤组织的诱导及农杆菌介导的棉花遗传转化
一、实验目的
掌握植物体细胞胚胎发生的基本理论;了解植物愈伤组织在诱导和分化过程中的形态学、细胞学特征;进一步巩固植物离体培养和无菌操作的步骤;掌握植物遗传转化的方法、理论;掌握根癌农杆菌介导的植物遗传转化技术。
二、实验原理
植物细胞全能性:植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息,从而具备发育成完整植株的遗传能力。
愈伤组织:
胚性愈伤:呈淡黄色或者黄绿色,质地较均匀;细胞球状或近球状,细胞核大,细胞质浓
非胚性愈伤:呈褐色、白色粉末状或白色、绿色坚硬块状 ;细胞一般为长柱状等非规则形状,细胞核小,细胞质较稀 。
农杆菌介导转基因的原理:植物细胞在受伤后,创伤分子诱导农杆菌Vir区各种基因的激活和表达,导致T-DNA被剪切,加工,形成T-链蛋白复合体(T-复合体),通过农杆菌和植物细胞的细胞膜,细胞壁进入植胞内,T-复合体上的核靶向序列可引导T-DNA整合到植物基因组。
三、材料与用品
1、实验材料:棉花材料YZ1(上周做的无菌苗)、农杆菌菌株LBA4404。
2、用具: 超净工作台, 显微镜,载玻片,天平,三角瓶,封口膜,橡皮筋,镊子,酒精灯,培养皿,滤纸,剪刀,医用手术刀,摇床。
3、药品:诱导、共培养培养基,卡宝品红染色液,MGL活化培养基,LB培养基,乙酰丁香酮(AS)。
四、实验步骤
(一)棉花愈伤组织的诱导及观察
1、愈伤诱导培养基的配制(第1周已做)
2、无菌苗的制备
3、无菌苗的切取:选取培养7天左右健壮的无菌苗臵于垫有滤纸的培养皿上,用解剖刀切掉子叶及生长点,切掉胚根及相连的约1/4的下胚轴,余下的下胚轴用作愈伤组织诱导的外植体,用解剖刀将下胚轴切成~0.7cm小段。
4、外植体接种及离体培养:将切离好的外植体接种于愈伤诱导培养基上(每瓶约7段),平行放臵,28℃光照培养,每天14小时光照,进行愈伤组织诱导及增殖培养。
5、愈伤组织继代(一个月后):待培养一个月左右,将增殖后的愈伤组织连同下胚轴切断继代到分化培养基上,进行胚性愈伤组织的分化。
6、愈伤组织形态观察:分别挑取少量非胚性愈伤和胚性愈伤组织,臵于载玻片上,滴几滴清水用镊子捣碎愈伤组织,然后滴加一滴卡宝品红染色数秒钟后,在显微镜下观察比较两者细胞学特征。
(二)农杆菌介导的棉花下胚轴的遗传转化
1、共培养及选择培培养基的配制(第2周已做,没倒皿的组倒皿)
2、无菌苗的制备(第2周已做)
3、农杆菌的活化(研究生帮忙做):从超低温冰箱内取出保存菌株的甘油管在冰上融化;按1:100的体积加入20ml LB液体培养基里摇菌,28℃暗培养36-48hr;将浑浊的农杆菌液涂布于LB平皿上,28℃暗培养36-48hr;把培养基表面菌落刮入装有20ml MGL培养基的三角瓶中(按1/1000比例加入AS),28℃、200rpm摇30min;OD值在0.5-1.5之间(估计)即可用于侵染。
4、下胚轴与农杆菌共培养:把无菌苗切成~7mm茎段(同诱导程序),用镊子夹到经活化的菌液中进行侵染,摇匀,侵染10分钟;倒掉菌液,将下胚轴转入装有滤纸的灭菌培养皿中,吹5分钟使表面稍为干燥;再将下胚轴分散布于垫有滤纸的共培养培养基中,19-21℃, 暗培养48-60小时结束共培养。
5、选择培养(48-60小时后):把经过共培养的下胚轴用镊子转入选择培养基中,培养30天左右继代一次转入相同的选择培养基中。
五、注意事项
1、在切无菌苗时,一定要使用锋利的刀片,尽量做到一刀能切断,避免挤压茎段。
2、无菌苗培养时间不宜过长(培养七天最好)。
3、从超低温冰箱内取出的甘油管,应尽量减少其在冰箱外的时间,用完后尽快放回冰箱。
4、侵染时下胚轴稍为干燥可以增加农杆菌的吸附。
5、共培养后第一次进行选择培养时应尽量使培养的环境保持干燥,可以减少农杆菌的污染。
6、整个过程均为无菌操作环境。
六、实验结果:
1.锥形瓶与平皿中的下胚轴生长状况均良好,观察到平皿中农杆菌介导转化的下胚轴有发黑的现象,而锥形瓶中诱导的愈伤组织则无发黑现象。
2.两个平皿中的拟南芥均生长缓慢且幼叶发黄,推测原因可能与杂菌感染有关。
生物技术综合实验报告 3
一、实验名称
用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动
二、实验目的
1、初步掌握高倍显微镜的使用方法。
2、观察高等植物的叶绿体在细胞质基质中的形态和分布
三、实验原理
高等植物的叶绿体呈椭球状,在不同的光照条件下,叶绿体可以运动,改变椭球体的方向,这样既能接受较多的光照,又不至于被强光灼伤。在强光下,叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源;在弱光下,叶绿体以其椭球体的正面朝向光源。因此,在不同光照条件下采集的`葫芦藓,其小叶内叶绿体椭球体的形状不完全一样。活细胞中的细胞质处于不断的流动状态,观察细胞质的流动,可以用细胞质基质中的叶绿体的运动做为标志。
四、材料用具
藓类的叶,新鲜的黑藻,显微镜,载玻片,盖玻片,滴管,镊子,刀片,培养皿,铅笔
五、实验过程(见书p30)
1、制作藓类叶片的临时装片
2、用显微镜观察叶绿体
3、制作黑藻叶片临时装片
4、用显微镜观察细胞质流动
六、讨论
1、细胞质基质中的叶绿体是否静止不动,为什么?
2、叶绿体的形态和分布与叶绿体的功能有什么关系?
3、植物细胞的细胞质处于不断的流动状态,这对于活细胞完成生命活动有什么意义?
4、用铅笔画一个叶片细胞,标出叶绿体的大致流动方向。
生物技术综合实验报告 4
一、实验目的
1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。
2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。
二、实验原理
当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时,细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中,使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大,当细胞不断失水时,原生质层就会与细胞壁逐渐分离开,也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时,外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中,整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态,使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。
三、材料用具
紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、实验过程(见书P60)
物理实验报告 ——化学实验报告 ——生物实验报告 ——实验报告格式 ——实验报告模板
五、讨论
1.如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的`蔗糖溶液中,这些表皮细胞会出现什么现象?
2.当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时,红细胞会不会发生质壁分离现象?为什么?
3.画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理,再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。
生物技术综合实验报告 5
实验教师:xxx
所在学校:xxx中学
目的要求:
1练习徒手切片
2认识叶片的结构
3画叶片的表皮细胞和保卫细胞
材料用具:
新鲜叶片(如菠菜、槐树、蚕豆的叶片),显微镜,双面刀片(两片、并在一起、一侧用胶布粘牢)、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。
方法步骤
方法与步骤要点
注意事项
(一)练习徒手切片,制作叶片横切片的临时切片
1将新鲜的叶片平放在小木板上。
2右手捏紧并排的两片刀片,沿着图中虚线的方向,迅速切割。
3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。要多切几次(每切一次,刀片要蘸一下水)。
4用毛笔蘸出最薄的一片,制成临时切片。叶片下面要垫上小块木板,以防损坏桌面。刀片要捏紧,切割速度要快,注意安全。
为了便于观察,载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片,选择切得最薄的一片用来观察。
(二)观察叶片的结构
1.用显微镜先观察叶片横切面的临时切片,再观察叶片的永久横切片。
2.观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。
仔细观察上、下表皮细胞的区别
(三)观察叶片的'下表皮
1.用镊子撕下一小块叶片的下表皮,制成临时装片。
2.用显微镜进行观察,下表皮细胞的形态是什么样子的,下表皮上有没有气孔?
撕取下表皮时,一定要薄,否则影响观察效果。
注意观察气孔的结构。
(四)画图
在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞,这一对保卫细胞要详细画,周围的细胞只需勾出轮廓。
画图时,要真实、实事求是。
讨论与交流
1.保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义?
2.从结构上看,叶片有哪些方面是适于接受阳光的?
生物技术综合实验报告 6
一、实验目的:
1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。2.了解细胞凋亡的生物学意义
3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法
二、实验原理:
1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物,用联苯胺处理标本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的'有无或多少。中间产物蓝色联苯胺是不稳定的,无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程。它是一个主动的、高度有序的,基因控制的,一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤:
细胞中过氧化物酶的显示
1、在载片上滴一滴PBS缓冲液;
2、取骨髓细胞:用断颈法处死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剥出后肢股骨,剪开股骨一端,用牙签尖的一端插入剪开的小孔中,抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上;
3、涂片:用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开,室温晾干;
4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸铜液,以盖满涂片为宜,处理30秒-1分钟。5、倾去硫酸铜液,直接滴入联苯胺混合液反应6分钟(以盖满涂片为宜)6、清水冲洗,番红复染2min。
7、镜检:清水冲洗,室温晾干,先低倍镜下观察,后换高倍镜下观察(油镜100×)
细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:
1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min
4、PBS缓冲液洗2次
5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液
7、普通光学显微镜下观察。吖啶橙染色:
1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞
3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液
6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
四、结果与分析:
1、根据随机选择的几个视野的统计,该样品的细胞凋亡率=227/506×100=44.9
Hela细胞凋亡过程中核染色质的形态变化(吖啶橙染色)
五、思考题:
1、细胞凋亡的调控机制
细胞凋亡是一个受基因调控、众多细胞膜受体和胞浆蛋白参与的细胞主动自杀过程,其触发因素多种多样,包括细胞内诱导因子和抑制因子对细胞凋亡的调控。
2、细胞凋亡的特征
凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体。
3、研究细胞凋亡的方法
定性的研究方法:常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察(普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜)
定量或半定量的研究方法:各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。
生物技术综合实验报告 7
一、实验目的:
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察,了解细胞的形态及其显微结构;
2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有一直观认识。
二、实验材料和仪器:
小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;
普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片。
三、实验步骤:
(一)细胞形态观察
l、动物细胞的观察
(1)人肝细胞切片:在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
(2)鸡血细胞涂片的观察:观察血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
取蚕豆叶片横切片的观察:注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
(二)细胞的大小和测量
1、卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的'焦平面上,再旋上目镜的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。
3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊,可转动目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm:
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数=————————— × 10
目镜测微尺的格数
四、实验结果:
1、目镜校正:40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24
2、细胞大小的测量:
五、作业与思考:
1、血细胞按含量高低,主要含有:红细胞,白细胞,血小板。
白细胞最大,红细胞次之,血小板最小。红细胞:主要的功能是运送氧。 白细胞:主要扮演了免疫的角色,当病菌侵入人体时,白细胞能穿过毛细血管壁,集中到病菌入侵部位,将病菌包围,吞噬。血小板:止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。
2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。
3、在不同放大倍数下,测定的细胞大小基本一致,但有一些偏差。放大倍数越大,在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大,而更容易测量准确。
生物技术综合实验报告 8
一、实验目的
1.初步学会探索酶催化特定化学反应的方法。
2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。
二、实验原理
淀粉和蔗糖都是非还原糖,它们在酶的催化作用下都能水解成还原糖,还原糖能够与斐林试剂发生氧化还原反应,生成砖红色的`氧化亚铜沉淀。
用淀粉酶分别催化淀粉溶液和蔗糖溶液,再用斐林试剂鉴定溶液中有无还原糖,就可以看出淀粉酶是否能催化这两种化学反应。
三、材料用具
滴管、试管、火柴、试管架、温度计、三脚架、石棉网、酒精灯、烧杯、质量分数为2%的新鲜淀粉酶溶液、质量分数为3%的可溶性淀粉溶液、质量分数为3%的蔗糖溶液、斐林试剂
四、实验过程
(见书P47)
五、讨论
1.制备的可溶性淀粉溶液,必须完全冷却后才能使用。为什么?
2.两支试管保温时,为什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?
3.如果2号试管也产生了砖红色沉淀,可能是由哪些原因造成的?
生物技术综合实验报告 9
一、实验目的:
1、学会如何使用显微镜观察细胞;
2、了解细胞的结构;
3、学会制作临时装片。
二、实验材料:(实验材料可换)松针、动物血液、动物神经细胞永久装片
三、实验用具: 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜(物镜5X、10X、40X)
四、方法步骤:
1、制作松针的临时切片:
(1)取干净的载玻片一个平置于试验台上,用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。
(2)将土豆切成条状(截面约:0.5X0.5cm)取两条,将一根松针夹在两个土豆条之间,用刀片削成尽量薄的薄片,削时,手腕不动,靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片,置于载玻片的水滴上。
(3)从一侧轻轻盖上盖玻片,不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴,即完成临时切片的制作。
2、观察切片:
(1)取出显微镜,置于试验台上靠左的位置,打开光源。
(2) 将上步制作好的切片置于显微镜的`载物台上,调整载物台位置,使盖玻片对准光源。
(3)使用5X物镜观察切片,使松针切片在视野中心,换成10X物镜,观察松针叶面横切结构。
(4)换成40X物镜观察,注意细胞及细胞内物质结构,画图。
3、动物血液临时装片的制作及观察(除了不用切片,其他类似)
4、 动物神经细胞永久装片的观察。
五、反思:
1、松针的叶面结构是什么样的?
2、动物细胞的结构是什么样的?与植物细胞又什么不同?
3、显微镜的物镜倍数愈大,视野的亮度如何?物体的大小如何?
4、如何调节焦距?
5、如何才能使切片尽量的薄?切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。
生物技术综合实验报告 10
一、 实验室规则
1.实验前应认真预习实验指导,明确实验目的和要求,写出预实验报告。
2.进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律,不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。
3.严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题,切勿盲目处理,应及时请教指导老师。
4.严格按操作规程使用仪器,凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用,对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法,才能开始使用;仪器发生故障,应立即关闭电源并报告老师,不得擅自拆修。
5.取用试剂时必须“随开随盖”,“盖随瓶走”,即用毕立即盖好放回原处,切忌“张冠李戴”,避免污染。
6.爱护公物,节约水、电、试剂,遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。
7.注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时,管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。
8.废纸及其它固体废物严禁倒入水槽,应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱,必须事先用水稀释,方可倒入水槽内,并放水冲走。
9.以实事求是的科学态度如实记录实验结果,仔细分析,做出客观结论。
实验失败,须认真查找原因,而不能任意涂改实验结果。实验完毕,认真书写实验报告,按时上交。
10.实验完毕,个人应将试剂、仪器器材摆放整齐,用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好,方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理,保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等,并严格执行值日生登记制度。
二、实验报告的基本要求
实验报告通过分析总结实验的结果和问题,加深对有关理论和技术的理解与掌握,提高分析、综合、概括问题的能力,同时也是学习撰写研究论文的过程。
1.实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。
2.实验报告的前三部分
①实验原理
②实验材料(包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材)
③实验步骤(包括实验流程与操作步骤)要求在实验课前预习后撰写,作为实验预习报告的内容。预习时也要考虑并设计好相应实验记录的表格。
3.每项内容的基本要求
(1)实验原理:简明扼要地写出实验的原理,涉及化学反应时用化学反应方程式表示。
(2)实验材料:应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪器。说明化学试剂时要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。试剂要标清所用的浓度。
(3)实验步骤:描述要简洁,不能照抄实验讲义,可以采用工艺流程图的方式或自行设计的表格来表示,但对实验条件和操作的'关键环节应写清楚,以便他人重复。
(4)实验记录:包括主要实验条件、实验中观察到的现象及实验中的原始数据。
(5)结果(定量实验包括计算):应把所得的实验结果(如观察现象)和数据进行整理、归纳、分析、对比,尽量用图表的形式概括实验的结果,如实验组与对照组实验结果的比较表等(有时对实验结果还可附以必要的说明)。
(6)讨论:不应是实验结果的重述,而是以结果为基础的逻辑推论。如对定性实验,在分析实验结果的基础上应有中肯的结论。还可以包括关于实验方法、操作技术和有关实验的一些问题,对实验异常结果的分析和评论,对于实验设计的认识、体会和建议,对实验课的改进意见等。
(7)结论:一般实验要有结论,结论要简单扼要,说明本次实验所获得的结果。
三、实验报告的评分标准(百分制)
1.实验预习报告内容(30分)
学生进入实验室前应预习实验,并书写预习报告。实验预习报告应包括以下三部分:
①实验原理(10分):要求以自己的语言归纳要点;
②实验材料(5分):包括样品、试剂及仪器。只列出主要仪器、试剂(常规材料不列);
③实验方法(15分):包括流程或路线、操作步骤,要以流程图、表格式给出要点,简明扼要。依据各部分内容是否完整、清楚、简明等,分以下三个等级给分。
优秀:项目完整,能反映实验者的加工、整理、提炼。
合格:较完整,有一定整理,但不够精炼。
不合格:不完整、缺项,大段文字,完全照抄教材,记流水账。
实验预习报告不合格者,不允许进行实验。该实验应重新预约,待实验室安排时间后方可进行实验。
2.实验记录内容(20分)
实验记录是实验教学、科学研究的重要环节之一,必须培养严谨的科学作风。
实验记录的主要内容包括以下三方面:
①主要实验条件(如材料的来源、质量;试剂的规格、用量、浓度;实验时间、操作要点中的技巧、失误等,以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据);
②实验中观察到的现象(如加入试剂后溶液颜色的变化);
③原始实验数据:设计实验数据表格(注意三线表格式),准确记录实验中测得的原始数据。记录测量值时,要根据仪器的精确度准确记录有效数字(如吸光值为0.050,不应写成0.05),注意有效数字的位数。
实验记录应在实验过程中书写;应该用钢笔或者圆珠笔记录,不能用铅笔。记录不可擦抹和涂改,写错时可以准确划去重记。记录数据时请教师审核并签名。
实验记录分以下三个等级给分。
优秀:如实详细地记录了实验条件、实验中观察到的现象、结果及实验中的原始数据(如三次测定的吸光度值)等;实验记录用钢笔或者圆珠笔记录,没有抹擦和涂改迹象。书写准确,表格规范(三线表)。有教师的签字审核。
合格:记录了主要实验条件,但不详细、凌乱;实验中观察到的现象不细致;原始数据无涂改迹象,但不规范。有教师的签字审核。
不合格:记录不完整,有遗漏;原始数据有抹擦和涂改迹象、捏造数据(以0分计);图、表格形式错误;用铅笔记录原始数据;无教师的签字审核。 若记录的结果有怀疑、遗漏、丢失,必须重做实验,培养严谨的科学作风。
3.结果与讨论(45分)
(1)数据处理(5分)
对实验中所测得的一系列数值,要选择合适的处理方法进行整理和分析。数据处理时,要根据计算公式正确书写中间计算过程或推导过程及结果,得出最终实验结果。要注意有效数字的位数、单位(国际单位制)。经过统计处理的数据要以X〒SD表示。可分成以下三个等级给分。
优秀:处理方法合理,中间过程清楚,数据格式单位规范。
合格:处理方法较合理,有中间计算过程;数据格式单位较规范。
不合格:处理方法不当;无中间过程;有效数字的位数、单位不规范。
(2)结果(20分)
实验结果部分应把所观察到的现象和处理的最终数据进行归纳、分析、比对,以列表法或作图法来表示。同时对结果还可附以必要的说明。
要注意图表的规范:表格要有编号、标题;表格中数据要有单位(通常列在每一列顶端的第一行或每一行左端的第一列)。图也要有编号、标题,标注在图的下方;直角坐标图的纵轴和横轴要标出方向、名称、单位和长度单位;电泳图谱和层析图谱等要标明正、负极方向及分离出的区带、色带或色斑的组分或成分。电泳结果还要标记泳道,并在图题下给出泳道的注释;要标出分子量标准的各条带的大小。并且注意需要结合图表对结果进行较详细的解释说明。
可分成以下三个等级给分。
优秀:实验结果有归纳、 解释说明,结果准确,格式规范。
合格:堆砌实验现象、数据,解释说明少。
不合格:最终实验结果错误且无解释说明,图表、数字不规范。
(3)讨论(20分)
讨论应围绕实验结果进行,不是实验结果的重述,而是以实验结果为基础的逻辑推论,基本内容包括:①用已有的专业知识理论对实验结果进行讨论,从理论上对实验结果的各种资料、数据、现象等进行综合分析、解释,说明实验结果,重点阐述实验中出现的一般规律与特殊性规律之间的关系。
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