- 相关推荐
会影响药品微生物检验结果的因素
在现实学习生活中，是不是经常追着老师要知识点？知识点也可以通俗的理解为重要的内容。那么，都有哪些知识点呢？以下是小编收集整理的会影响药品微生物检验结果的因素，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。
微生物的生长受很多因素的影响，特别是药品中污染的微生物尤为如此。药品微生物检验是检测药品中具有繁殖能力的活细胞，这些活的微生物在药品中处于不稳定的状态，它的检出与否受很多因素的影响，主要影响因素有如下几点：
一、供试品组分
由于供试品本身的特性，可能含有具有抑菌作用的组分成分，如抗生素中药中的黄莲、牛黄、冰片等。另外，很多供试品中加入的抑菌剂或防腐剂用于防止供试品中的微生物再污染和再生殖，以及增溶剂、乳化剂、抗氧剂等其他辅料，这些组分在一定浓度下对微生物具有抑制作用，并可能对药品中污染的微生物造成不同程度的损伤。供试品中污染的微生物在这些物质的影响下有可能检不出，这时，它们虽然被抑制甚至受到损伤，但并未死亡，在一定条件在塔门还可以稳定地存活一段时间，当微生物生存环境改变时，如抑菌成分消除或浓度降低时，这些微生物便可以复苏并繁殖，患者使用后同样可危及人体健康。对于这些药品，如按常规方法进行微生物检验，往往显示假阴性结果。
除此之外，在药品微生物检验中，由于原料来源不同，特别是中药制剂，或者生产工艺的差别，使用的辅料不同等原因，使不同厂家生产的同一产品，甚至是同一厂家生产的同一产品不同批次的药品往往对同一中微生物的生长也有不同程度的影响。
从理论上讲，许多药品含有影响微生物生长的物质，许多试验也表明了这一点，表12-1列出了已知试验菌的菌数在不同药品中的回收率，有的药品几乎对所有试验菌均有很强的抑制或杀死作用。因此，供试品的组分及其浓度直接影响供试品中污染微生物的检查结果准确与否。
二、药品微生物的检查方法
检查方法包括供试液制备方法和微生物检测方法，它是保证检验结果准确可靠的最重要前提。
微生物检测时，首先进行供试液的制备，不同特性的供试品，应采用不同的供试液制备方法，如水溶性供试品直接加稀释剂制备即可；不溶水的固体供试品采用匀浆或加混悬剂制成均匀的混悬液；非水溶性油剂或软膏剂，因其与水难溶，使其中污染的微生物难与培养基接触或因缺氧而无法生长，需采用乳化剂使成均匀分散的乳浊液；有抑菌成分的供试品客加入消除抑菌成分的中和剂；离心沉淀及薄膜过滤消除抑菌成分的方法等，这些物理或化学的供试液制备方法在进行过程或多或少影响着供试品中微生物的回收。
同一份供试液采用不同的微生物检测方法，如常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法、MPN法等，其检测的结果可不同，因为其中所含的供试品浓度不同，特别是有抑菌作用的供试品。
药品微生物控制的发展的研究
微生物污染是药品质量评估的重要指标，目前各国药典收录的药品无菌检查和微生物限度检查方法只对药品终产品质量进行评价，且对无菌检查不合格的药品要求不得进行复验。药品微生物检测实验室如缺少对实验环境的监督和控制，则无法评估微生物阳性结果的污染来源。而药品检测过程中的微生物阳性结果可能源于实验过程中环境的污染，因此判断检出菌与环境菌的相关性，是排除实验过程污染、减少假阳性结果、提高检验结果准确性的必不可少的环节。同时现阶段药品安全管理仍存在监管漏洞，当药品受到致病微生物污染时，往往出现定溯源难、应变慢等问题。若建立微生物检测实验室日常的环境微生物菌库，则可较好地解决上述问题。目前国外通过分子生物学手段对病原微生物建库的研究较多，如RIDOMwebsite提供根据16SDNA序列的差异建立的病原微生物库。国内对制药环境建立环境微生物菌库相关方面的研究也有报道，如PEI等曾采用FTIR法构建洁净室环境菌的FTIR谱库，但该方法对微生物的培养条件及预处理要求严格，随机误差也较大。目前在药品微生物检测实验室建立环境微生物菌库方面的研究仍较少。
本研究从笔者工作的药品微生物检测实验室环境中不同部位、设备材料及活动人员进行连续7个月采样收集微生物，共获得248株细菌和6株霉菌，对收集的细菌采用全自动微生物生化鉴定仪(Vitek2Compact)进行鉴定，对生化鉴定无确切结果的90株细菌及6株霉菌均采用3500MicroSeq基因测序分析系统进行细菌16SrDNA和霉菌LSUrDNA测序鉴定，并对某次采样收集获得的6株金黄色葡萄球菌米用Diversilab进行同源性分析。通过对鉴定结果的整理和分析，初步建立了药品微生物检测实验室环境微生物库，为今后本实验室微生物检测结果污染溯源调查提供了信息保障，同时也为制药企业开展建立环境微生物信息库和微生物污染溯源提供了技术指导。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
光学显微镜（日本奥林巴斯）；VITEK2Compact全自动微生物生化仪、全自动革兰氏染色仪、Diversilab同源性分析系统(法国梅里埃)；梯度96孔VertiPCR仪(美国ABI公司）；PowerpacBasic电泳仪(美国Bio-Rad公司）；3500MicroSeq全自动微生物基因分析鉴定系统(美国ABI公司)。
1.2环境微生物的收集
连续7个月对微生物实验室环境中不同部位、活动人员及设备材料采用胰蛋白胨大豆琼脂(广东环凯)平板，分别通过接触碟法(人员身上取样)、浮游菌采样器(环境浮游微生物取样)、空气沉降法(环境沉降微生物取样)及棉签擦拭法(设备和材料表面取样)进行微生物样本采集，分离纯化后共获得248株细菌和6株霉菌，采用甘油冻存管置-70°C冰箱保存。
1.3生化鉴定
采用VITEK2Compact对获得的248株细菌的新鲜培养物根据革兰染色镜检结果选取GN、GP、BCL不同鉴定试剂卡进行生化鉴定。
1.4细菌16SrDNA及霉菌LSUrDNA测序鉴定对VITEK鉴定无确切鉴定结果的90株细菌及6株霉菌分别采用3500MicroSeq全自动微生物基因分析鉴定系统进行细菌16SrDNA和霉菌LSUrDNA测序鉴定。采用3500MicroSeq系统配套试剂对90株细菌和6株霉菌的TSA平板培养物分别进行DNA抽提、PCR扩増和纯化、标记反应及标记反应纯化，最后进行毛细管电泳测序。
1.56株金黄色葡萄球菌的Diversilab同源性分析某次采样收集到6株菌，采用VITEK生化鉴定和16SrDNA测序鉴定结果均为金黄色葡萄球菌，且在所测16SrDNA基因片段中序列完全相同。为进一步获得6株菌的分型信息，采用基于重复序列扩増技术的Diversilab同源性分析系统进行实验。对6株菌分别米用DiversiLab仪器配套的金黄色葡萄球菌的rep-PCR扩増试剂盒先进行扩増，后吸取1^LPCR产物加入芯片的标本孔，进行电泳分离扩増的DNA的片段，采用仪器自带软件绘制基因分型同源性关系图。
2结果
2.1菌株来源统计
本次建库收集到环境微生物分离菌株共计254株，包括248株细菌和6株霉菌，所有的霉菌均来源于沉降菌收集。大部分菌株均来源于在微生物实验室活动的人员(137株)，占全部分离菌株的53.9%。其余环境沉降微生物(30株)、环境浮游微生物(47株)及来源于设备和材料表面的微生物(40株）占全部分离菌株比例相差不大，分别为11.8%，18.5%和15.7%。
2.2环境微生物菌库的建立
结合生化鉴定和测序鉴定结果的254株微生物的鉴定结果统计。其中葡萄球菌属细菌最多，占全部分离菌的34.3%；其次为芽孢杆菌和微球菌，分别占全部分离菌的32.7%和12.6%。环境沉降菌和空气浮游菌共收集到77株微生物，占污染微生物总数的30.3%。
葡萄球菌和藤黄微球菌均为常见环境菌。从设备材料和操作人员共收集分离表面微生物177株，占污染微生物总数的69.7%。污染微生物比例最高的分别为芽孢杆菌属、菌，分别占表面微生物总数的29.9%、15.8%和14.1%。采用生化鉴定和测序鉴定2种方法对微生物实验室环境中收集到的254株菌进行鉴定，通过鉴定结果的整理和分析，初步建立了药品微生物检测实验室环境微生物库。
2.3 6株金黄色葡萄球菌的同源性分析结果
6株金黄色葡萄球菌米用Diversilab系统进行同源性分析，实验结果显示6株金黄色葡萄球菌高度同源，最低菌株间的亲缘关系也达到99%(亲缘关系>95%，即为同源)，所以6株菌应该来自同一个污染源。
3讨论
从建立的环境微生物库各方面的对比情况分析可知，大部分微生物均来源于微生物实验室中活动的人员。葡萄球菌属和微球菌属细菌为人体易携带污染的微生物，这两类微生物在多个采样点均有发现，所以可能是由于人员活动或表面接触带来的交叉污染，表明操作人员携带的微生物是实验室环境菌的主要来源之一，为了减少污染应严格控制人员的更衣和清洁程序。环境中同样存在着多种芽孢杆菌，在环境中不易被消毒灭菌，可能是由于消毒频次和消毒剂效力问题导致的残留污染，应该増加消毒灭菌频率并有计划地更换消毒剂确保杜绝污染。
本研究通过7个月的持续采样收集环境微生物，初步建立了药品微生物检测实验室的环境微生物库，但是环境微生物库的建立是个持续动态的过程，因此需要在日常监测中不断完善。本次建库采用微生物鉴定(生化鉴定和测序鉴定)和分型技术(Diversilab同源性分析系统)对微生物实验室进行监控，建立和健全了日常监督检查方法，为今后开展污染水平的风险评估和不良事件调查提供技术平台，同时也为高风险药品生产企业建立环境微生物数据库提供技术指导。
【会影响药品微生物检验结果的因素】相关文章：
关于影响显卡功耗的因素总结02-20
影响合同效力的因素12-27
家庭因素对孩子成长的影响分析05-04
微生物检验岗位职责06-19
非生物因素对生物的影响说课稿07-03
微生物检验岗位职责3篇06-19
微生物检验岗位职责(3篇)03-22
微生物检验实习心得体会03-14
影响职业生涯发展的八大因素？10-18